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柱式植物RNAOUT使用手册
点击次数:729 发布时间:2017-10-16
 

柱式植物RNAOUT

Column Plant RNAout

产品及特点

本产品是天泽基因植物RNAOUT(CAT#:3080)的柱式升级产品它结合了植物RNAOUT的性(效果近五十多种各类植物中得到验证,植物名单见植物RNAOUT产品介绍的附录)和天泽基因柱式纯化系列产品的快捷性该产品特点如下:

  • 操作更加简单快速,处理一个样品只需要约十分钟,比植物RNAOUT快一倍
  • RNA纯度更高,平均 OD260/280一般都2.0左右,能够有效去除大多数植物中的多糖污染。
  • 小RNA回收效率更高。
  • 适用于所有用植物RNAOUT能提出RNA的植物(注:对有些植物可能需要在溶液A中额外添加RVC)
  • 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成实验
  • 性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
  • 一站式,提供RNase-free的样品收集管。

规格及成分

成 份

编 号

50次包装

溶液A

71203A

50 mL

溶液B

71203B

15 mL

溶液C

71203C

50 mL

离心吸附柱

60911

50套

通用洗柱液

60408

50 mL

RNA洗脱液

71207

10 mL

使用手册

71203sc

1份

注:溶液B为淡黄色液体,使用前请观察颜色是否正常。若溶液B有油粒状颗粒及分层,属正常现象,不影响使用。

运输及保存

常温运输,4℃保存,有效期一年。

自备试剂

使用方法

  • 估算组织细胞的用量。每次微量提取一般需要100-200 mg植物叶片、或50-100 mg植物种子、或200-500 mg植物果实。
  • 样品破碎:
  • 匀浆法:先将新鲜植物组织剪切成小块(保存在RNALOCKER中的植物组织需用纸吸去RNALOCKER液体后剪切成小块)放入10-15 mL塑料离心管中,加入1 mL溶液A,然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫但不影响提取效果。
  • 液氮研磨法(适用于复杂,易降解样品):取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中,迅速将组织研磨成粉末后,将粉末转移到合适的塑料离心管中,加入1 mL溶液A,立即剧烈振荡20秒,充分混匀。

注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用

  • 将匀浆物或液氮研磨物转移至干净的1.5 mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。有的植物组织(比如果实)含有大量水份匀浆液多于1 mL,转移时也只取1 mL
  • 在离心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自备氯,在振荡器振荡30秒混匀,此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
  • 室温12000-15000 g离心3-5分钟两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
  • 将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中下层有机相和中间层含有DNA蛋白质和其他杂质避免触及或吸取。留下100 uL上清液不取。
  • 加入等体积的溶液C,充分颠倒混匀如果有沉淀产生(对某些植物,属于正常现象),千万不要去掉沉淀,一定要把所有的混合物上柱。
  • 将一半的溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到离心吸附柱中,13000-15000 g室温离心分钟,弃穿透液
  • 将剩下的一半溶液(如果有沉淀,则先混匀)转移到同一离心吸附柱中, 13000-15000 g室温离心分钟,弃穿透液
  • 加0.7 mL通用洗柱液,室温离心分钟,弃穿透液0.3 mL通用洗柱液,室温离心分钟,弃穿透液一般样品如此洗涤两次即可,但如果在第7步加入溶液C后有沉淀产生,则需要洗三次,每次加入的通用洗涤液的量分别为0.4、0.3和0.3 mL。
  • 室温离心分钟。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
  • 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中,加入50-100 uL RNA洗脱液,室放置1-2分钟
  • 13000-15000 g室温离心分钟,离心管中溶液即为RNA样品,可以立即使用或存放于-80℃待用。
  • RNA完整性的电泳检测:如果需要做Northern杂交,强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳,因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques,28:414,2000)。
  • RNA产量产率测定将5-10 μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40 μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
  • RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。

关联产品

柱式植物RNAout 2.0(CAT#:90404)。

 

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