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生物素衍生物的标记及其产物的检测原理
点击次数:944 发布时间:2017-07-07
 

生物素衍生物的标记及其产物的检测原理

一、生物素简介

生物素(biotin,B)分子量244.31D.生物素分子有两个环状结构,其中Ⅰ环为咪唑酮环,是与亲和素结合的主要部位;Ⅱ环为噻吩环,C2上有一戊酸侧链,其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的*结构,经化学修饰后,生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。

biotin-molecular-structure

二、生物素衍生物简介

1、常见的标记方法

标记方法举例说明
标记蛋白质氨基

 

 

 

 

 

生物素羟基琥珀酰亚胺酯(BNHS)★适用于标记抗体中性或偏碱性的蛋白质
长臂活化生物素(BCNHS)

 

 

添加两个6-氨基己糖,形成连接臂
标记蛋白质醛基生物素酰肼(BHZ)标记偏酸性糖蛋白
肼化生物胞素(BCHZ)除醛基外,还可标记氨基
标记蛋白质巯基马来酰亚胺-丙酰-生物胞素(MPB) 
标记核酸光生物素侧链芳香基叠氮物,光照后,变为芳香基硝基苯
生物素脱氧核苷三磷酸(Bio-dUTP) 
 BNHS和BHZ直接标记核酸对碱基配对有影响

★对抗原、抗体标记后活性不变;可对标记材料(如酶)标记,但碱性磷酸酶标记后活性将降低。

 

2、常见的生物素衍生物结构及其性质

biotin-reagent

 

三、生物素标记产物的检测

1、检测原理:

亲和素(avidin,AV)亦称抗生物素蛋白、卵白素,是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白,分子量为68kD,等电点pI=10.5;耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用.尤其是与生物素结合后,稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素,二者之间的亲和力极强,亲和素常数(K)为10^15 l/mol,比抗原与抗体间的亲和力(K=10^5~10^11 L/mol)至少高1万倍,二者的结合特异性高和稳定性好。因此,可以用标记HRP或荧光素的亲和素或链霉亲和素去检测生物素的标记产物。

2、检测方法举例:

1)荧光标记的亲和素进行荧光检测

 

2)标记亲和素-生物素ELISA检测法(LBA法)

biotin-LBA

3)桥接亲和素-生物素ELISA检测法(BAB法)

biotin-BAB

4)亲和素-生物素-过氧化物酶复合物ELISA检测法(ABC法)

biotin-ABC

5)标记链霉亲和素-生物素ELISA检测法(LSAB法)

biotin-LSAB

 

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