生物素衍生物的标记及其产物的检测原理 一、生物素简介 生物素（biotin，B）分子量244．31D．生物素分子有两个环状结构，其中Ⅰ环为咪唑酮环，是与亲和素结合的主要部位；Ⅱ环为噻吩环，C2上有一戊酸侧链，其末端羧基是结合抗体和其他生物大分子的*结构，经化学修饰后，生物素可成为带有多种活性基团的衍生物——活化生物素。 
二、生物素衍生物简介 1、常见的标记方法 | 标记方法 | 举例 | 说明 | | 标记蛋白质氨基 | 生物素羟基琥珀酰亚胺酯（BNHS）★ | 适用于标记抗体和中性或偏碱性的蛋白质 | | 长臂活化生物素（BCNHS） | 添加两个6-氨基己糖，形成连接臂 | | 标记蛋白质醛基 | 生物素酰肼（BHZ） | 标记偏酸性糖蛋白 | | 肼化生物胞素（BCHZ） | 除醛基外，还可标记氨基 | | 标记蛋白质巯基 | 马来酰亚胺-丙酰-生物胞素（MPB） | | | 标记核酸 | 光生物素 | 侧链芳香基叠氮物，光照后，变为芳香基硝基苯 | | 生物素脱氧核苷三磷酸（Bio-dUTP） | | | | BNHS和BHZ直接标记核酸 | 对碱基配对有影响 |
★对抗原、抗体标记后活性不变；可对标记材料（如酶）标记，但碱性磷酸酶标记后活性将降低。 2、常见的生物素衍生物结构及其性质 
三、生物素标记产物的检测 1、检测原理： 亲和素（avidin，AV）亦称抗生物素蛋白、卵白素，是从卵白蛋白中提取的一种由4个相同亚基组成的碱性糖蛋白，分子量为68kD，等电点pI=10.5；耐热井耐受多种蛋白水解酶的作用．尤其是与生物素结合后，稳定性更好。每个亲和素能结合4个分子的生物素，二者之间的亲和力*，亲和素常数（K）为10^15 l/mol，比抗原与抗体间的亲和力（K＝10^5～10^11 L/mol）至少高1万倍，二者的结合特异性高和稳定性好。因此，可以用标记HRP或荧光素的亲和素或链霉亲和素去检测生物素的标记产物。 2、检测方法举例： 1）荧光标记的亲和素进行荧光检测 2）标记亲和素-生物素ELISA检测法（LBA法） 
3）桥接亲和素-生物素ELISA检测法（BAB法） 
4）亲和素-生物素-过氧化物酶复合物ELISA检测法（ABC法） 
5）标记链霉亲和素-生物素ELISA检测法（LSAB法） 
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