直接 ELISA法[直接 ELISA法] 实验步骤 1. 包被抗原1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上,按要求往后进行系列稀释。2) 酶标板上覆盖封口膜,室温孵育 2 小时,或者 4 °C 一夜。孵育时间需要优化。3) 倒掉孵育溶液,用 PBS 洗板 2 次,每孔 200 μl。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液 [ELISA 抗原 缓冲液 抗体] 实验步骤 1. 包被抗原 1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。用移液器吸取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上,按要求往后进行系列稀释。 2) 酶标板上覆盖封口膜,室温孵育 2 小时,或者 4 °C 一夜。孵育时间需要优化。 3) 倒掉孵育溶液,用 PBS 洗板 2 次,每孔 200 μl。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。 2. 封闭 1) 用含 5% 脱脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 缓冲液封闭酶标板上剩余的蛋白结合位点,每孔 200 μl。或者用其他封闭剂如 Block ACE、BSA(牛血清蛋白)代替。 2) 封口膜覆盖酶标板室温至少孵育 2 小时,或者 4 °C 一夜。 3) PBS 洗板 2 次。 3. 加抗体孵育 1) 加入抗体,每孔 100 μl,稀释到*浓度(参照厂家推荐),使用前用封闭液现配。 2) 封口膜覆盖酶标板室温孵育 2 小时,孵育时间需要进行优化。通常 2 小时孵育即可获得足够强的信号,但如果获得的信号较弱时,可4 °C 孵育一夜获得较强信号。 3) PBS 洗板 4 次 4. 检测 1) 用多通道吸液器加入底物,每孔 100 μl(或 50 μl)。 2) 显示出足够深的颜色后,加终止液(如有必要),每孔 100 μl。 |