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间接 ELISA法
点击次数:556 发布时间:2016-11-10
 

间接 ELISA法

间接 ELISA法] 实验试剂 碳酸氢盐/碳酸盐包被缓冲液 (100 mM)PBS封闭液洗涤液抗体稀释缓冲液 实验步骤 1. 包被抗原1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。吸取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上的*排孔,按要求往后进行系列稀释。2) 酶标板上覆盖封口膜,室温孵育 2 小时,或者 4 °C 夜。孵育时间需要优化。3) 倒掉包被液,用 PBS 洗 [ELISA 间接 缓冲液 抗原 包被]

实验步骤

1. 包被抗原

1) 用 PBS 或碳酸盐缓冲液稀释抗原至终浓度 20 μg/ml。吸取 50 μl 稀释抗原到 PVC 酶标板上的*排孔,按要求往后进行系列稀释。

2) 酶标板上覆盖封口膜,室温孵育 2 小时,或者 4 °C 夜。孵育时间需要优化。

3) 倒掉包被液,用 PBS 洗板 3 次,每孔 200 μl。在水池上轻甩倒掉洗液,在纸巾上轻拍酶标板除去残留液体。

2. 封闭

1) 用含 5% 脱脂奶粉或含 5% 血清的 PBS 缓冲液封闭酶标板上剩余的蛋白结合位点,每孔加 200 μl。也可用其他封闭剂如 block ACE、BSA(牛血清蛋白)代替。

2) 封口膜覆盖酶标板室温至少孵育 2 小时,或者 4 °C 夜。

3) PBS 洗板 2 次。

3. 加一抗和二抗进行孵育

1) 每孔加入 100 μl 稀释好的一抗。

2) 封口膜覆盖酶标板室温孵育 2 小时,孵育时间需要进行优化。通常 2 小时孵育即可获得足够强的信号,但如果获得的信号较弱时,可4 °C 孵育夜获得较强信号。

3) PBS 洗板 4 次。

4) 加标记二抗,每孔 100 μl。稀释到*浓度(参照说明书),使用前用封闭液现配。

5) 封口膜覆盖酶标板室温孵育 1-2 小时。

6) PBS 洗板 4 次。

4. 检测

1) 用多通道吸液器向每孔加入 100 μl(或 50 μl)底物。

2) 显示出足够深的颜色后,加终止液每孔 100 μl(如有必要)。

3) 酶标仪读取吸光度值(光密度)。

 

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