柱式病毒RNAOUT使用手册

产品及特点

本产品是在天泽基因一管式病毒RNAOUT的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品中提取微量病毒RNA的产品，它具有下列特点：

• 操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
• 灵敏度高，通过RT-PCR检测到的zui终灵敏度可以达到50拷贝/mL。
• 安全无毒，不需要使用苯酚和氯等有机溶液。
• 如果加上病毒离心富集步骤，zui多可以处理1.5 mL液体病毒样品。
• 与RT-PCR和荧光RT-PCR兼容。
• 价廉物美，性价比远低于国外同类产品。
• 适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。

规格及成分

运输及保存

常温运输，4℃保存，有效期一年。

自备试剂

无

使用方法

• 在1.5 mL离心管中加入0.1-0.2 mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5 mL液体在4℃下24，000 g冷冻离心60分钟，移弃1.3 mL后继续操作。
• 加入0.6 mL溶液A，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。注意：溶液 A 在 4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀*溶解并充分摇匀后再取用。
• 将溶液全部转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
• 12，000-15，000 g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
• 加入0.8 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12，000-15，000 g室温离心1分钟，弃收集管中穿透液。
• 12，000-15，000 g室温离心半分钟。
• 在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100 uL通用洗脱液，然后将离心吸附柱套入一新的1.5 mL离心管中，室温放置2分钟。
• 12，000-15，000 g室温离心1分钟，离心管中收集的样品即为RNA。
• RNA样品可以直接用于RT-PCR或逆转录反应，也可放-80℃长期保存。

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疑难解答

Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？

A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒zui多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的量往往比一个细胞中核酸的量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。

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