人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
双抗体夹心法(检测未知抗原) | 间接法(检测未知抗体) |
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 一晚。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 | 1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃一晚。次日洗涤3次。
2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 |
1。人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒的测定应进行对EDTA血浆。
2。对样品进行检测，重复400毫升EDTA血浆是必需的。
3。在一个薰衣草[ EDTA管收集全血]。
4。应及时将血浆分离，优选地在冷藏的离心机，并储存在20°C或更低。
5。EDTA血浆样品可以存储长达8小时在2，8°
6。EDTA血浆样品冷冻在–20°C稳定长达4个月。
人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒除了非零校准所有的试剂，试剂盒控制，洗精准备使用。非标准/校准器的制备对于每个非零校准（校准B通过F）和试剂盒对照1和2，使每个用蒸馏水或去离子水混合2毫升小瓶。
让瓶子站立10分钟，然后混合*的温柔的反演，以确保完成重组。使用校准和控制等尽可能重建。冻结（20摄氏度）剩余的校准和控制尽快使用后。校准和控制在–20°C稳定6周后重建与3次冻融建议在程序中处理时的周期。洗涤浓缩液混洗浓缩物。如果沉淀是由于在洗涤浓缩物低温贮藏，如4°C，溶解放置在一个37°C水浴或烤箱的小瓶旋转或搅拌。增加洗涤浓缩液（30毫升）570毫升蒸馏水或去离子水混合。人抗角蛋白丝聚集素/丝集蛋白抗体(AFA)ELISA试剂盒的稀释液稳定90天在室温下储存（18－26摄氏度）。储存/稳定性储存所有的试剂在2，8°C，除了洗涤集中，应保持在室温下直到稀释，以避免沉淀。
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