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尿调素-慢性的有效标志之一
点击次数:696 发布时间:2017-04-19
 

尿调素-慢性的有效标志之一

尿调素(Uromodulin)是一个由UMOD基因编码的糖蛋白,是哺乳动物正常人体尿液中含量zui高的蛋白,主要来自哺乳动物肾脏亨氏袢。

尿调素单体的分子量约为85kDa, 它有几种不同的异构体。尿调素在尿液中以聚集体的形式存在,所以分子量可以达到几百万道尔顿。当pH低时,可析出形成凝胶。

针对尿调素分别进行了序列分析、选取Glu28~Glu149进行基因克隆和蛋白表达,获得尿调素的重组蛋白,。用该蛋白作为免疫原分别免疫小鼠和兔后,获得了单克隆抗体和多克隆抗体,以及生物素标记的多克隆抗体PAG918Hu71。这些抗体可用于WBICCIHC-PIHC-FELISA等实验中。

利用已经获得的抗体,进行抗体配对,选取组装成试剂盒的抗体组装成试剂盒。试剂盒可用来检测不同生物样本中UMOD的含量。

现在研究表明,尿调素与妊娠、慢性肾脏疾病等都有重要关系,不孕和流产的妇女尿中UrM水平显著高于正常人。故常见研究UMOD采用的样本为尿液和精液。尿液和精液的处理办法如下:

尿液样本的处理方法:请收集清晨*次尿液(中段尿),或24小时尿液,2000×g离心15分钟后收集上清,并将标本保存于-20oC,且应避免反复冻融。

精浆:精液标本收集于无菌容器中,室温或37oC水浴箱中液化。待精液完全液化后,将精液 4000 rpm离心10 min分离精浆。

处理好样本后可进行上样。以下是采用试剂盒测的的检测数据,样本包括尿液样本和精液样本。请见数据。

样本采用的是100倍稀释,采用双标曲。

检测原始数据OD(450nm-630nm)如下:

实验室的样本背景不详,但体现出对于样本良好的检出性。同时复孔质检的差异小,标曲线性高于99%

实验结果以及各方数据表明了试剂盒的高质量。而临床对Uromodulin许多方面的功能有待进一步研究,.研发的蛋白、抗体以及Elisa试剂盒对Uromodulin的研究提供了必要的生物手段。

 

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