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细胞复苏经验总结
点击次数:344 发布时间:2017-04-11
 

细胞复苏经验总结


1. 可以提前把需要的体积的培养液放到培养瓶里,拧松瓶盖,放到孵箱里半小时到1小时,这样温度和ph值都已经细胞生长了。
 
2. 为防止冻存管在升温时爆裂等,可以在放入水浴前就实现在超净台里把盖子拧松一下然后再拧上。从液氮罐里拿出来不是说一定要分秒必争地放入水浴。细胞从液氮的零下1百多度升到比如负八十这个过程对细胞没有损害。有足够的时间handle这些。只不过一旦细胞化了,就应该争分夺秒地把它放入培养液了,主要是为了稀释DMSO。常温下高浓度DMSO对细胞的损害比较大。
 
3. 水浴温度40℃应该也没问题,但正规的protocol上从来都只说37℃。反正应该相差不大,但不能太高了。另外,不必等细胞全化了再从水浴里取出来。只要冰块浮起来了就差不多了。我一般zui多水浴不超过1.5分钟。然后经过喷酒精消毒什么的差不多又半分钟过去了。每次都还有没化的。先把已经融解的部分吸到培养瓶里,再从培养瓶里吸些培养液到冻存管里,余下的冰块瞬间就化了,再一起吸到培养瓶里。
 

 

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