ELISA试剂盒试验常见问题简析
ELISA试剂盒实验时的留心事项如下：
1、正式实验时，应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验成果的性。有时本底较高，阐明有非特异性反应，可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2、在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很主要的，其间包括：
（1）固相载体的选择：ELISA试剂盒很多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在运用前均可进行选择：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，查询其显色反应是不是均一性，据此判明其吸附功用是不是出色。
（2）ELISA试剂盒包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体外表时，恳求纯度要好，吸附时通常恳求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响，通常多选用4℃18～24小时。ELISA试剂盒蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定：即用不一样的蛋白质浓度（0.1、1.0和10μg／ml等）进行包被后，在其它实验条件相一同，查询阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说通常为1～10μg／ml。
（3）酶符号抗体作业浓度的选择：ELISA试剂盒首先用直接ELISA法进行开端效价的滴定（见酶符号抗体部份）。然后再固定其它条件或采用“方阵法”（包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体别离为不一样的稀释度）在正式实验系统里地滴定其作业浓度。
（4）ELISA试剂盒酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择恳求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如OPD等）有潜在的致癌作用，应留心防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是如今较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应参与强酸或强碱以停止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制作，尤其是H2O2在临用前参与。 |
