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ELISA试剂盒试验常见问题简析
点击次数:369 发布时间:2017-03-14
 

ELISA试剂盒试验常见问题简析
ELISA试剂盒实验时的留心事项如下:
1、正式实验时,应别离以阳性对照与阴性对照操控实验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验成果的性。有时本底较高,阐明有非特异性反应,可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
2、在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很主要的,其间包括:
(1)固相载体的选择:ELISA试剂盒很多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在运用前均可进行选择:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,查询其显色反应是不是均一性,据此判明其吸附功用是不是出色。
(2)ELISA试剂盒包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,恳求纯度要好,吸附时通常恳求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,通常多选用4℃18~24小时。ELISA试剂盒蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一同,查询阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
(3)酶符号抗体作业浓度的选择:ELISA试剂盒首先用直接ELISA法进行开端效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采用“方阵法”(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体别离为不一样的稀释度)在正式实验系统里地滴定其作业浓度。
(4)ELISA试剂盒酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择恳求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应留心防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是如今较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应参与强酸或强碱以停止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制作,尤其是H2O2在临用前参与。

 

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