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白介素试剂盒的工作模式以双抗体夹心法为主

更新时间:2025-12-26点击次数:8
  白介素(Interleukin, IL)是一类由免疫细胞分泌的细胞因子,在炎症反应、免疫调节、造血功能等生理过程中发挥核心作用。检测白介素水平对疾病诊断(如自身免疫病、感染性疾病)、疗效监测及基础研究具有重要意义。白介素试剂盒是基于抗原-抗体特异性结合原理设计的体外诊断工具,其核心功能是实现对样本中特定白介素分子的高灵敏度、高特异性定量或定性检测。
 
  白介素试剂盒的工作模式以双抗体夹心法(Sandwich ELISA)为主,辅以竞争法、间接法等变体,具体流程可分为以下步骤:
 
  1.固相载体包被捕获抗体
 
  试剂盒中的微孔板(通常为96孔聚苯乙烯板)预先包被针对目标白介素(如IL-6、IL-1β)的单克隆捕获抗体。该抗体通过物理吸附或化学偶联固定于板孔表面,形成固相免疫吸附剂。捕获抗体的选择需满足高亲和力、高特异性,且不与其他细胞因子交叉反应。
 
  2.样本孵育与抗原结合
 
  待测样本(血清、血浆、细胞培养上清等)加入微孔后,其中的目标白介素分子与固相捕获抗体特异性结合,形成“抗体-抗原”复合物。未结合成分通过洗涤步骤去除,减少非特异性干扰。
 
  3.生物素标记检测抗体结合
 
  加入生物素化检测抗体,该抗体与目标白介素的另一表位结合,形成“捕获抗体-抗原-检测抗体”三明治结构。生物素标记便于后续信号放大,同时提高检测灵敏度。
 
  4.酶标亲和素信号放大
 
  加入链霉亲和素-酶(如辣根过氧化物酶HRP)复合物。链霉亲和素与生物素具有较高的亲和力(Kd≈10222 M),可高效结合检测抗体上的生物素分子。酶催化底物(如TMB)发生显色反应,生成有色产物。
 
  5.定量分析
 
  通过酶标仪测定吸光度值(OD值),根据标准品绘制的剂量-响应曲线计算样本中白介素浓度。有些试剂盒采用化学发光法替代显色反应,进一步提升灵敏度。

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