目的基因的PCR扩增

实验原理

PCR（聚合酶链式反应）是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括3个基本步骤：⑴变性：目的双链DNA段在94℃下解链；⑵退火：两种寡核苷酸引物在适当温度（50℃左右）下与模板上的目的序列通过氢键配对；⑶延伸：在Taq DNA聚合酶合成DNA的zui适温度下，以目的DNA为模板进行合成。由这3个基本步骤组成一轮循环，理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍，这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板，所以经25~35轮循环就可使DNA扩增达10⁶倍。

实验试剂

Taq酶  
相应引物 
dNTP等

实验步骤

1.PCR反应
 (1) 所用溶液融化后置于冰上。
 (2) 依次混匀下列试剂：

25μl      10×PCR buffer

15μl      25mmol/L MgCl₂

25μl      4种dNTP

5μl       引物1

5μl       引物2

124μl     ddH₂O

1μl       Taq 酶  

     混匀后离心5秒种。      
   (3) 分成10管，每管各加5μl模板DNA（约1ng），编号。
  (4) 混匀后离心5秒种，PCR扩增。
  (5) 参数设定

2. 电泳

取10μl扩增产物用1%琼脂糖胶进行电泳分析，检查反应产物及长度。

注意事项

1. PCR反应非常灵敏，操作应尽量在无菌操作台中进行。
2. 吸头、离心管应高压灭菌，每次吸头用毕应更换，不要相互污染试剂。
3. 试剂前，应短促离心10秒钟，然后再打开管盖，以防手套污染试剂及管壁上的试剂污染吸头侧面。