|
|
|
|


 技术文章 ARTICLE 你当前的位置:首页>> 技术文章


目的基因的PCR扩增
点击次数:364 发布时间:2018-01-23

目的基因的PCR扩增

实验原理

PCR(聚合酶链式反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法。它包括3个基本步骤:⑴变性:目的双链DNA段在94℃下解链;⑵退火:两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;⑶延伸:在Taq DNA聚合酶合成DNA的zui适温度下,以目的DNA为模板进行合成。由这3个基本步骤组成一轮循环,理论上每一轮循环将使目的DNA扩增一倍,这些经合成产生的DNA又可作为下一轮循环的模板,所以经25~35轮循环就可使DNA扩增达106倍。

实验试剂

Taq酶  
相应引物 
dNTP等

实验步骤

 

1.PCR反应
 (1) 所用溶液融化后置于冰上。
 (2) 依次混匀下列试剂:

25μl      10×PCR buffer

15μl      25mmol/L MgCl2

25μl      4种dNTP

5μl       引物1

5μl       引物2

124μl     ddH2O

1μl       Taq 酶  

     混匀后离心5秒种。      
   (3) 分成10管,每管各加5μl模板DNA(约1ng),编号。
  (4) 混匀后离心5秒种,PCR扩增。
  (5) 参数设定

T (℃)

Duration

Cycle

94

2   min

1

94

0.5  min

 

30

55-60

0.5  min

72

1   min

72

10  min

1

4

2   hr

storage

2. 电泳

取10μl扩增产物用1%琼脂糖胶进行电泳分析,检查反应产物及长度。

注意事项

1. PCR反应非常灵敏,操作应尽量在无菌操作台中进行。
2. 吸头、离心管应高压灭菌,每次吸头用毕应更换,不要相互污染试剂。
3. 试剂前,应短促离心10秒钟,然后再打开管盖,以防手套污染试剂及管壁上的试剂污染吸头侧面。


上海康朗生物科技有限公司主营:Elisa试剂盒,人Elisa试剂盒,大鼠Elisa试剂盒,小鼠Elisa试剂盒,猪Elisa试剂盒,细胞,生物细胞学等科研产品
上海康朗生物科技有限公司 版权所有 总访问量:172206 地址:www.shklsw.com 邮编:201612
电话:86-021-61998208 传真: 手机:18217752821 联系人:蔡盼盼 邮箱:shklbio@163.com
GoogleSitemap 网址:www.shklsw.com 技术支持:化工仪器网 管理登陆 ICP备案号:沪ICP备15039594号-1
电话
021-61998208
手机
18217752821
点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息 点击这里给我发消息
分享到:

化工仪器网

推荐收藏该企业网站