悬浮培养细胞传代步骤

绝大多数有限细胞系、连续细胞系的原代培养都是贴壁依赖的，因此依附于某一表面形成单细胞层。但是还有一些细胞，特别是来源于血液系统或某些特定肿瘤组织的细胞，是不依赖于贴壁的，悬浮生长。

悬浮细胞培养与单层细胞培养相比有很多优点。其中zui大的优势是，传代时只需要对细胞进行稀释即可，由于不存在蛋白水解酶、机械力等造成的创伤，传代后基本不会影响细胞生长速率。此外，悬浮培养的细胞能充分利用培养空间，而且能够非常直观观察到细胞规模扩大。细胞可以在类似于培养酵母菌或细菌的发酵罐样的生物反应器内大规模扩增。

根据细胞类型不同，悬浮培养的接种密度通常介于2× 104 cells/ml到5 × 105 cells/ml之间，有些细胞甚至可以达到2 x 106 cells/ml。如果细胞接种密度过低，他们将经历一个生长停滞期，细胞生长十分缓慢甚至全部死亡。但是如果接种密度过高的话，细胞会很快将培养基内的营养成分耗竭，然后突然死亡。请参照说明书了解推荐接种密度、传代比例、培养基更换时间表以及推荐使用的培养基等具体信息。

悬浮培养细胞传代步骤：

1．事先将*培养基自冰箱内拿出，平衡至室温。

2．使用移液枪吹打重悬培养在静置培养容器内的细胞，使细胞悬液充分混匀。取适量细胞悬液用血球计数板计算细胞密度。

3. 根据说明书推荐的zui低接种密度及步骤2算出的细胞密度，计算需要接种到新培养容器内的细胞悬液体积以及需要加入的新鲜培养基的量。

4. 在新的培养容器内加入步骤3计算出的所需添加的新鲜培养基及细胞悬液。如有必要，可在培养容器内充满无菌过滤的CO2，封好培养容器并置于合适的温度下孵育培养。

5. 通常情况下，换液时不需要每次都*更换成新的培养基，除非细胞密度非常高或者是培养基的pH偏酸性（培养基颜色偏黄）。如需*更换培养液，将细胞悬液在125g离心力下离心10 min，吸弃旧培养基，然后使用新鲜培养基重悬细胞。